हाउसकीपिंग जीन और प्रोटीन, जिनमें β-एक्टिन, GAPDH, HPRT1, और RPLP1 शामिल हैं, अक्सर पश्चिमी धब्बों में आंतरिक नियंत्रण के रूप में उपयोग किए जाते हैं, क्योंकि उन्हें संवैधानिक रूप से, समान स्तरों पर, प्रयोगों के दौरान व्यक्त किया जाता है। हॉबिट, हाल के अध्ययनों से पता चला है कि हाउसकीपिंग प्रोटीन (एचकेपी) की अभिव्यक्ति का रूप अलग-अलग सेल प्रकारों और जैविक स्थितियों में बदल सकता है। विशेष रूप से, वैज्ञानिक प्रकाशकों और फंडिंग एजेंसियों को अब आवश्यकता है कि प्रत्येक प्रयोग के लिए सामान्यीकरण नियंत्रणों को पहले से मान्य किया जाए ताकि परिणाम की सटीकता और सटीकता सुनिश्चित की जा सके।
फ्लोरोसेंट एंटीबॉडी
पश्चिमी धब्बा में छवि प्रोटीन के लिए फ्लोरोसेंट एंटीबॉडी का उपयोग करते समय, सामान्यीकरण की आवश्यकता होती है कि उपयोगकर्ता मात्रात्मकता की ऊपरी और निचली सीमाओं को परिभाषित करता है और प्रत्येक प्रतिजन के लिए संकेत तीव्रता और नमूना द्रव्यमान मात्रा के बीच रैखिक संबंध को चिह्नित करता है। उद्देश्य प्रोटीन और सामान्यीकरण नियंत्रण दोनों का पता लगाने की गतिशील सीमा के भीतर फ्लोरोसेंट करने की आवश्यकता है। कई एचकेपी उच्च स्तर पर व्यक्त किए जाते हैं और अत्यधिक व्यक्त उद्देश्य प्रोटीन के साथ उपयोग के लिए पसंद किए जाते हैं। कम व्यक्त प्रोटीन एक ही धब्बा पर प्रकाश डालना मुश्किल है।
छवि 289A | Western blot २ ए २ रसायनयुक्त खोज | Bensaccount / Attribution 3.0 Unported | Page URL : (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Western_blot_chemiluminescent_detection.png) from Wikimedia Commons | URL: Wikimedia Commons.
लेखक : Yavor Mendel
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