एफआरईटी के लिए फ्लोरोफोरस का उपयोग किया जाता है

जैविक उपयोग के लिए एक सामान्य जोड़ी फ्लोरोफोरस एक सियान फ्लोरोसेंट प्रोटीन( CFP) - पीला फ्लोरोसेंट प्रोटीन( YFP) जोड़ी है। दोनों हरे रंग के फ्लोरोसेंट प्रोटीन( GFP) के रंग रूप हैं । जैविक फ्लोरोसेंट रंजक के साथ लेबलिंग के लिए एक मेजबान प्रोटीन की शुद्धि, रासायनिक संशोधन और इंट्रासेल्युलर इंजेक्शन की आवश्यकता होती है। GFP वेरिएंट को आनुवंशिक इंजीनियरिंग द्वारा एक मेजबान प्रोटीन से जोड़ा जा सकता है जो अधिक सुविधाजनक हो सकता है। इसी तरह, प्रोटीज़ क्लीवेज कॉनटेनेशन से जुड़े CFP और YFP (टेंडेम-डिमर) का फ्यूजन एक क्लीवेज परख के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है।

BRET

फ्लोरोफोरे दाताओं के साथ किए गए FRET का प्रतिबंध प्रतिदीप्ति अंतरण आरंभ करने के लिए बाहरी रोशनी की आवश्यकता है, जो स्वीकर्ता के प्रत्यक्ष उत्तेजना या photobleaching से परिणामों में पृष्ठभूमि शोर पैदा कर सकता है । इस खामी से बचने के लिए, bioluminescence अनुनाद ऊर्जा हस्तांतरण (या BRET) विकसित किया गया है। इस तकनीक को एक-जीव luciferase (आमतौर पर Renilla से luciferase reniformis) की तुलना में के बजाय का उपयोग करता है CFP एक प्रारंभिक फोटोन उत्सर्जन के साथ संगत उत्पादन करने के लिए YFP ।

छवि 080A | फॉस्टर की प्रतिध्वनि ऊर्जा हस्तांतरण की अवधारणा का कार्टून चित्र( FRET)। | कर्टिस नेवु (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Concept_of_FRET.png),

छवि 080A | फॉस्टर की प्रतिध्वनि ऊर्जा हस्तांतरण की अवधारणा का कार्टून चित्र( FRET)। | कर्टिस नेवु (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Concept_of_FRET.png), "कॉन्सेप्ट ऑफ FRET", https://creativecommons.org/licenses/by.sa/3.0/legalcode विकिमीडिया कॉमन्स से

लेखक : Yavor Mendel

संदर्भ:

आणविक जीवविज्ञान तकनीक मैं

आणविक जीवविज्ञान III की तकनीक

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